96孔板每孔体积(96孔板体积多大)

频道:信息 日期:2022-08-06- 06:51:13 浏览:23

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本文目录一览:

6、12、24、96孔板的底面积、高度及体积是多少?一般应用时加入体积量是多少?谢谢

6孔板底面积9.6cm;培养液2.5ml;

12孔板底面积4.5cm;培养液2ml;

24孔板底面积2cm;培养液1ml;

96孔板底面积0.32cm;培养液0.1ml。

孔板流量计又称为差压式流量计,是由一次检测件(节流件)和二次装置(差压变送器和流量显示仪)组成,广泛应用于气体、蒸汽和液体的流量测量。具有结构简单,维修方便,性能稳定,使用可靠等特点。

扩展资料:

孔板是测量流量的差压发生装置,配合各种差压计或差压变送器可测量管道中各种流体的流量。节流装置包括环室孔板,喷嘴等。节流装置与差压变送器配套使用,可测量液体、蒸汽、气体的流量,它广泛应用于石油、化工、冶金、电力、轻工等部门。

充满管道的流体,当它们流经管道内的节流装置时,流束将在节流装置的节流件处形成局部收缩,从而使流速增加,静压力低,于是在节流件前后便产生了压力降,即压差,介质流动的流量越大,在节流件前后产生的压差就越大,所以可以通过测量压差来衡量流体流量的大小。这种测量方法是以能量守衡定律和流动连续性定律为基准的。

参考资料来源:百度百科-孔板

贴壁细胞mtt试验原理及方法步骤是什么?详细点,,,

MTT原理

MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide,汉语化学名为 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,商品名:噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。

MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。 缺点:由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水,需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加,也会对实验结果的准确性产生影响,而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。

MTT 溶液的配制方法 通常,此法中的MTT 浓度为5mg/ml。因此,可以称取MTT 0.5克,溶于100 ml的磷酸缓冲液(PBS)或无酚红的培养基中,用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌,放4℃ 避光保存即可。在配制和保存的过程中,容器最好用铝箔纸包住。实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光,觉得这样比较好。 需要注意的是,MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力,但不能测定细胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候,为了保证实验结果的线性,MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。

MTT一般最好现用现配,过滤后4ºC避光保存两周内有效,或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存,避免反复冻融,最好小剂量分装,用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。我一般都把MTT粉分装在EP管里,用的时候现配,直接往培养板中加,没必要一下子配那么多,尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。

MTT有致癌性,用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.配成的MTT需要无菌,MTT对菌很敏感;往96孔板加时不避光也没有关系,毕竟时间较短,或者你不放心的时候可以把操作台上的照明灯关掉.

配制MTT时用PBS(ph=7.4)溶解。PBS配方:Nacl 8g + Kcl 0.2g + Na2HPO4 1.44g + KH2PO4 0.24g调pH 7.4,定容1L。

普通MTT法实验步骤:1:接种细胞:用含10%胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液,以每孔1000-10000个细

胞接种到96孔板,每孔体积200ul.2: 培养细胞:同一般培养条件,培养3-5天(可根据试验目的和要求决定培养时间)。3:呈色:培养3-5天后,每孔加MTT(噻唑蓝)溶液(5mg/ml用PBS配制,pH=7.4)20ul.继续孵育4 h,

终止培养,小心吸弃孔内培养上清液,对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。

每孔加150ul DMSO,振荡10min,使结晶物充分融解。4:比色:选择490nm波长,在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值,记录结果,以时间为

横坐标,吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。

药物MTT法实验步骤贴壁细胞:1: 收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度 1000-

10000 孔,(边缘孔用无菌PBS填充)。2: 5%CO2,37℃孵育,至细胞单层铺满孔底(96孔平底板),加入浓度梯度的药物,原则上,

细胞贴壁后即可加药,或两小时,或半天时间,但我们常在前一天下午铺板,次日上午

加药.一般5-7个梯度,每孔100ul,设3-5个复孔.建议设5个,否则难以反应真实情况3: 5%CO2,37℃孵育16-48小时,倒置显微镜下观察。4: 每孔加入20ulMTT溶液(5mg/ml,即0.5%MTT),继续培养4h。若药物与MTT能够反应,

可先离心后弃去培养液,小心用PBS冲2-3遍后,再加入含MTT的培养液。5: 终止培养,小心吸去孔内培养液。6: 每孔加入150ul二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10min,使结晶物充分溶解。在酶联免

疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。7: 同时设置调零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜),对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介

质、培养液、MTT、二甲基亚砜)。

悬浮细胞:1: 收集对数期细胞,调节细胞悬液浓度1×106/ml,按次序将①补足的1640(无血清)培

养基40ul ;②加Actinomycin D(放线菌素D有毒性)10ul用培养液稀释 (储存液100g/ml,需预试寻找最佳稀释度,1:10-1:20);③需检测物10ul;④细胞悬液50ul(即5×104cell/孔),共100ul加入到96孔板(边缘孔用无菌水填充)。每板设对照(加100l 1640)

2: 置37℃,5%CO2孵育16-48小时,倒置显微镜下观察。3: 每孔加入10 ul MTT溶液(5 mg/ml,即0.5%MTT),继续培养4 h。(悬浮细胞推荐使用

WST-1,培养4 h后可跳过步骤4),直接酶联免疫检测仪OD570nm(630nm校准)测量各孔的吸光值)

4、离心(1000转x10min),小心吸掉上清,每孔加入100 ul二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10 min,使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD570nm(630nm校准)测量各孔的吸光值。

5、同时设置调零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜DMSO),对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜),每组设定3复孔。

注意事项:(1) 选择适当得细胞接种浓度。(2) 避免血清干扰:一般选小于10%的胎牛血清的培养液进行试验。在呈色后尽量吸尽孔

内残余培养液。(3) 设空白对照:与试验平行不加细胞只加培养液的空白对照。其他试验步骤保持一致,

最后比色以空白调零。

(4) MTT实验吸光度最后要在0-0.7之间,超出这个范围就不是直线关系。

(5) 用96孔板培养细胞做MTT测细胞活力,应该加多少1640培养基,多少MTT和DMSO合适

根据书上说的加200ul1640,20ulMTT,150ulDMSO 加DMSO之前要尽量去掉培养液,便于

DMSO溶解甲臜颗粒进行比色测定

(6) 一般每孔4000个细胞为宜,既细胞浓度在20000个/ml,MTT加20ul,作用四小时后洗掉上清液,注意不要将甲瓉洗掉,然后每孔加150ul DMSO,在脱色摇床上振荡10分钟,然后测吸光值。

96孔板加了10ul样能跑出来吗

96孔板加了10ul样不能跑出来。

96孔板的每孔准确体积是365ul,96孔板底面积0.32cm,培养液0.1ml,但是要尽量避免加样过多,最多只能加200ul,也就是0.2ml。96孔板是一种用于测量流量的差压产生装置。可与各种差压表或差压变送器配套使用,测量管道中各种流体的流量。设备采用特殊工艺制作,使细胞达到适宜吸附状态,所有产品均经过伽马射线灭菌。

96孔板跑pcr一般用多少体积?

96孔板的每孔准确体积是365ul。96孔细胞培养板、皿系列产品选用进口光学透明纯聚苯乙稀制造。采用特殊工艺而成,使细胞达到最佳吸附状态,所有产品均以伽玛射线灭菌处理。

96孔板每个孔多少ml?

96孔板每一孔250μl。

通常每一孔不少于100μl,每毫升不少于104个细胞!所以每一孔≥26个细胞,具体放多少根据自己需求,有的是每一孔放一个细胞。

6孔板简介

96孔细胞培养板、皿系列产品选用进口光学透明纯聚苯乙稀制造。采用特殊工艺而成,使细胞达到最佳吸附状态,所有产品均以伽玛射线灭菌处理。

应用

细胞培养系列能促进原生代细胞:如神经细胞传代细胞、如肿瘤细胞等动物与人体细胞生长和繁殖,在国内外众多高校和科研机构、生物工程公司广泛使用。

使用注意事项

和普通细胞培养一样,使用96孔板请注意你的细胞、培养基、用具无菌,尤其注意操作时气流方向,可能带菌的物品、手不要在上风处移动。

请问96孔板一孔大概多少细胞?

96孔板每一孔250μl。

通常每一孔不少于100μl,每毫升不少于104个细胞!

所以每一孔≥26个细胞,具体放多少根据自己需求,有的是每一孔放一个细胞。

仅供参考,谢谢!

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